本文不是設(shè)備參數(shù)介紹，是可直接上崗操作的參考。

 包含：凝膠尺寸、梳子選型、上樣量、不同片段對應(yīng)膠濃度、恒壓 / 恒流底層原理、分段跑膠程序、制膠禁忌、緩沖液壽命、條帶拖尾 / 彌散 / 歪帶 / 無帶全套故障排查、核酸 + 蛋白雙實驗完整標準參數(shù)。

一、設(shè)備分工（實驗必須牢記）

1. HE 系列 = 只跑瓊脂糖核酸（DNA/RNA）
不可以跑蛋白、不可以跑 PAGE 膠。

2. VE586PRO = 只做蛋白濕轉(zhuǎn)（WB 轉(zhuǎn)膜）
不可以跑核酸。

3. EPS1500 = 萬能電源
核酸→恒壓
轉(zhuǎn)膜→恒流

二、三套電泳槽【膠尺寸 + 梳子 + 上樣量 + 適用實驗】總表

1. HE-90 / HE90B（小型快速鑒定槽）

凝膠尺寸

• 6×6 cm 迷你膠

• 6×12 cm 標準小膠
特點：膠薄、體積小、緩沖液少、跑速最快

梳子 & 上樣量（實驗標準）

• 0.75mm 36 齒密梳：6–8 μl（純 PCR 鑒定）

• 1.0mm 20 齒標準梳：12–15 μl（常規(guī)樣本）

• 1.5mm 12 齒寬梳：20–25 μl（低濃度補量、Marker）

適用實驗（嚴格限制）

• 普通 PCR 陽性 / 陰性鑒定

• 質(zhì)粒有無鑒定

• 不適合：大片段分離、不適合切膠回收、不適合高精度分型

2. HE-120 / HE120B（實驗室全能主力槽）【重點】

四種凝膠尺寸（全覆蓋）

• 6×6 cm

• 6×12 cm

• 12×6 cm（窄長分離膠）

• 12×12 cm 大板標準膠（科研主力）

梳子體系（帶回收梳）

常規(guī)分析梳

• 0.75mm 24/30 齒：10–15 μl（細條帶、高分辨率）

• 1.0mm 16/20 齒：18–25 μl（日常通用）

• 1.5mm 12 齒：30–35 μl（低濃度樣品）

【關(guān)鍵實驗功能】回收專用寬梳

• 4/6/8 齒大孔梳 1.5mm

• 上樣量 40–45 μl

• 可切膠回收的組合

HE120 真正優(yōu)勢（科研）

• 大板膠路徑長 → 分離度最高

• 可慢跑、可快跑、可回收、可精細分型

• 所有畢業(yè)論文、期刊實驗、載體構(gòu)建

3. HE-220 / HE220W（高通量篩查槽）

凝膠尺寸

• 15×12 cm 超大膠板

• 可同時放兩塊 12×12 膠
總通量 192 孔

梳子 & 上樣

• 96 齒密梳 0.75mm：8–12 μl

• 48/600 齒長梳 1.0mm：15–20 μl

實驗定位

只適合：大批量篩查、基因型普查、樣本初篩
禁止用于：回收、高精度分離、大片段分析

三、核心重點：什么時候用恒壓？什么時候用恒流？（實驗原理級）

1. 核酸電泳【100% 恒壓】

底層原理

瓊脂糖膠屬于多孔分子篩

• 電壓決定遷移速率

• 電流只代表整體熱量

如果核酸用恒流：
隨著電泳升溫 → 緩沖液電阻下降 → 電壓持續(xù)暴跌
結(jié)果：條帶歪斜、拖尾、前后不齊、彌散、跑不動

三套槽標準恒壓參數(shù)（實驗 SOP）

1. HE90 小膠快速鑒定
120–150V 恒壓 10–20 min
適用：短片段 PCR、菌檢、質(zhì)粒篩查

2. HE120 標準科研膠（常用）
常規(guī)分離：100–130V 20–35min
切膠回收專用慢速程序：80–100V 35–50min（條帶舒展、不擠帶）

3. HE220 高通量批量跑膠
80–110V 恒壓 30–50min
（雙膠電流大，必須限流 1000mA）

4. 大片段 2k–10kb 精細分離
50–70V 低壓慢跑
防止大片段撕裂、拖尾

2. 蛋白濕轉(zhuǎn) VE586PRO【100% 恒流】

底層原理

轉(zhuǎn)膜是電荷驅(qū)動蛋白遷移
電流 = 帶電粒子數(shù)量 = 蛋白轉(zhuǎn)移量
必須恒定，電壓自動浮動

標準轉(zhuǎn)膜參數(shù)

-<30kDa）：200–300mA 15–25min

• 中分子蛋白：200mA 30min

• 大分子蛋白（>70kDa）：120–150mA 過夜慢速濕轉(zhuǎn)

四、實驗最重要：片段大小 → 凝膠濃度選擇（新手最容易錯）

瓊脂糖凝膠濃度實驗標準

0.8% 膠

• 分離范圍：5kb–20kb 大片段、基因組、質(zhì)粒

• 特點：孔大、跑得快、分辨率低

1.0% 膠【實驗室萬能通用膠】

• 分離：800bp–6kb

• PCR、質(zhì)粒、酶切、鑒定 90% 實驗用它

1.2% 膠

• 分離：300bp–3kb

• 普通短片段 PCR、雜帶區(qū)分

1.5% 膠

• 分離：100bp–1.5kb

• 微小片段、突變檢測、高分辨分型

2.0% 高濃度膠

• 分離：50bp–800bp

• 僅用于短片段精細區(qū)分

五、完整制膠實驗 SOP（含禁忌）

1. TAE/TBE 選擇（實驗區(qū)別）

TAE（主流 95% 實驗）

• 優(yōu)點：回收效率高、條帶平整

• 缺點：長時間跑膠發(fā)熱快

• 適用：所有常規(guī)實驗、切膠回收用 TAE

TBE

• 優(yōu)點：耐熱、適合長時間慢跑

• 缺點：抑制酶活性，回收不能用 TBE

• 適用：高分型、超長時間電泳

2. 凝膠凝固標準

• 常溫凝固 20–30min

• 禁止吹風、禁止暴曬、禁止提前拔梳

• 拔梳必須垂直，否則孔歪、漏樣、條帶彎曲

3. 膠厚控制（對應(yīng)梳子）

• 0.75mm 薄膠：條帶細、好看、適合拍照

• 1.5mm 厚膠：載量大、適合低濃度、回收

六、上樣量實驗標準（防過載、防拖尾核心）

通用黃金原則

1. 片段越大，上樣量越少（大片段極易拖尾）

2. 濃度越低，可適當多加

3. 回收孔最大容忍 45μl

4. 密梳絕對不能超量，立刻彌散

過載后果（實驗室 90% 人踩坑）

• 條帶肥胖、拖尾、彌散

• 相鄰孔串樣

• 無法定量、無法回收

七、實驗室儀器電泳全程判斷標準（怎么看跑膠是否正常）

正常電泳現(xiàn)象

1. 剛開始電流緩慢上升（正常發(fā)熱）

2. 溴酚藍直線平整下移

3. 無氣泡大量翻滾

4. 孔緣清晰不擴散

異常即時判斷

1. 條帶歪、波浪：電壓不穩(wěn) / 膠未凝好 / 孔破損

2. 底部拖尾：樣品過載、蛋白雜質(zhì)多、DNA 降解

3. 整體彌散：膠濃度不對、電壓過高、過熱

4. 孔內(nèi)亮團：樣品沒沉降、鹽離子過高

5. 條帶前后不齊：必須恒壓，之前用了恒流

八、緩沖液更換標準（實驗級細節(jié)）

1. 新配膠必須新緩沖液

2. 連續(xù)跑 2 次必須更換

3. 出現(xiàn)升溫快、電流亂、條帶歪 → 立刻更換

4. 回收實驗必須全新 TAE（否則回收污染、效率極低）

九、EPS1500 電源高級實驗設(shè)置（老手專用）

1. 恒壓 + 最大電流限制 1000mA（推薦默認設(shè)置）
防過熱、防擊穿、防變形

2. 多塊膠同時跑：電流自動疊加，限流

3. 跑膠程序可分段：

? 前段低壓整孔

? 后段高壓分離
適合疑難樣本、易彌散樣本

十、核酸 VS 蛋白兩套實驗完整總結(jié)（對照表）

十一、實驗室新手最完整避坑清單

1. 核酸絕對不能恒流

2. 回收只用 HE120 + 大孔梳 + 新 TAE

3. 大片段必須低壓慢跑

4. 密梳嚴禁超 10μl，必彌散

5. 雙膠跑膠一定要限流

6. TBE 絕對不做回收

7. 膠未凝固嚴禁上樣

8. 上樣必須沉孔，不能飄樣

9. 轉(zhuǎn)膜不能用恒壓，轉(zhuǎn)不均勻

10. 緩沖液反復(fù)使用會導(dǎo)致所有條帶異常

蘇州阿爾法生物提供的最終實驗選型總結(jié)】

1. 僅教學(xué)、簡單 PCR、少量樣本 → HE90

2. 科研、畢業(yè)論文、酶切、克隆、回收、精細實驗 → HE120

3. 批量篩查、公司檢測、高通量樣本 → HE220

4. 蛋白 WB 實驗 → 必配 VE586PRO+EPS1500 恒流模式