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當前位置:首頁技術(shù)文章限制性內(nèi)切酶-分子克隆里的 DNA分子剪刀

限制性內(nèi)切酶-分子克隆里的 DNA分子剪刀

更新時間:2026-10-10點擊次數(shù):109

在分子生物學(xué)實驗室里,想要對 DNA 進行剪切、拼接、改造,離不開一類關(guān)鍵工具酶 ——限制性內(nèi)切酶,它也被大家形象地稱為 DNA 分子剪刀,是基因合成、分子克隆、遺傳圖譜構(gòu)建實驗中的核心材料。

限制性內(nèi)切酶的本領(lǐng)很特別:可以精準識別 DNA 上一段特定的核苷酸序列(通常 4~8 個堿基對),并在特定位點切斷 DNA 雙鏈,切割后會形成完整末端。這項技術(shù)從 1975 年第一批商業(yè)化限制性內(nèi)切酶上市至今,長期被海外企業(yè)主導(dǎo)。如今國內(nèi)也實現(xiàn)了限制性內(nèi)切酶的規(guī)模化生產(chǎn),打破國外壟斷,國產(chǎn)產(chǎn)品穩(wěn)步提升。

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國產(chǎn) LightNing(雷霆)系列限制酶,重新定義酶切體驗

傳統(tǒng)限制性內(nèi)切酶使用時常常遇到不少麻煩:不同酶需要搭配不同緩沖液,雙酶切、多酶切條件需要反復(fù)摸索;酶切等待時間長,動輒 1 小時以上;部分酶存在星號活性,孵育時間一長就會亂切 DNA,導(dǎo)致實驗失敗。

LightNing(雷霆)系列限制性內(nèi)切酶,針對性解決了這些痛點: 

? 通用緩沖液,多酶切自由搭配全系共用同一種通用緩沖液,不管是單酶切,還是雙酶切、多酶切,都可以在同一體系內(nèi)反應(yīng),同時兼容下游各類分子生物學(xué)實驗。不用反復(fù)換緩沖液、摸索反應(yīng)條件,真正實現(xiàn)一管化操作,大幅減少實驗操作步驟,省時省力。

? 極速酶切,5~15 分鐘完成反應(yīng)常規(guī)酶切往往需要孵育 1 小時甚至更久,而 LightNing 系列限制酶,僅需 5~15 分鐘就能夠完成酶切反應(yīng),節(jié)省大量等待時間。即便延長孵育時間,也幾乎不會出現(xiàn)亂切的現(xiàn)象。

? 極低星號活性,實驗結(jié)果更穩(wěn)定星號活性就是限制酶非特異性切割 DNA,是酶切實驗最常見的坑。該系列通過特殊蛋白與菌株改造方案,搭配成熟純化工藝,把星號活性控制在極低水平,長時間孵育也不用擔心 DNA 被錯誤切割,實驗重復(fù)性更好。

? 可視化 Color 緩沖液,酶切電泳一步走配套 CutOne® Color 紅色反應(yīng)緩沖液,反應(yīng)體系自帶顏色。酶切結(jié)束之后,樣品可以直接上樣跑瓊脂糖凝膠電泳,不用額外添加電泳上樣染料,簡化實驗流程。

實驗數(shù)據(jù)看實力

凝膠電泳驗證結(jié)果直觀展示了這款酶的性能:

  1. 快速酶切驗證:使用 LightNing® EcoRI、SalI、SacI,在 CutOne® 緩沖液中,以質(zhì)粒為底物分別做單酶切、雙酶切、三酶切。孵育 5 分鐘、15 分鐘兩組樣品,都能獲得干凈、完整的酶切條帶,證明短時間孵育即可充分切割 DNA。

  2. 緩沖液兼容性驗證:EcoRI、BamHI、XbaI 分別在普通 CutOne® 緩沖液和紅色 CutOne® Color 緩沖液中進行酶切。兩種緩沖液條件下酶切效果保持一致,紅色緩沖液不會對酶活性產(chǎn)生干擾。

應(yīng)用場景小結(jié)

限制性內(nèi)切酶是分子生物學(xué)基礎(chǔ)工具,廣泛用于質(zhì)粒構(gòu)建、基因克隆、載體改造、菌種鑒定、基因圖譜分析等實驗。LightNing 雷霆系列限制酶憑借快速反應(yīng)、通用緩沖液、低星號活性、彩色緩沖液等優(yōu)勢,無論是高??蒲袑嶒炇?,還是藥企 GMP 研發(fā)平臺,都可以簡化酶切方案,減少實驗失敗,提升分子克隆實驗效率。

更多實驗室內(nèi)切酶,國產(chǎn)內(nèi)切酶可以進入蘇州阿爾法生物進行了解。

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