在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，核酸和蛋白濃度測(cè)定是幾乎所有下游實(shí)驗(yàn)（qPCR、Western Blot、載體構(gòu)建、測(cè)序送樣）的第一步。但很多實(shí)驗(yàn)人員都遇到過(guò)同一個(gè)問(wèn)題：同一個(gè)樣品，反復(fù)測(cè)量，濃度結(jié)果忽高忽低，不知道該信哪一次。

濃度測(cè)不準(zhǔn)，輕則上樣量算錯(cuò)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，重則整批數(shù)據(jù)作廢。本文梳理核酸蛋白濃度測(cè)定誤差的常見(jiàn)來(lái)源，并介紹奧盛 Nano-300 超微量分光光度計(jì)的應(yīng)對(duì)方案。

一、核酸蛋白濃度測(cè)不準(zhǔn)的四大常見(jiàn)原因

1. 稀釋引入累積誤差 傳統(tǒng)比色皿法處理高濃度樣品時(shí)必須預(yù)先稀釋?zhuān)♂尡稊?shù)越高，移液誤差被放大的倍數(shù)越大，最終濃度值偏離真實(shí)值越遠(yuǎn)。

2. 上樣體積誤差 樣品體積低于 2 μL 時(shí)，普通移液器的誤差率顯著上升，樣品掛壁、氣泡混入都會(huì)導(dǎo)致實(shí)際進(jìn)入檢測(cè)光路的樣品量與預(yù)期不符。

3. 比色皿殘留污染 比色皿內(nèi)壁的痕量殘留會(huì)干擾 260 nm/280 nm 吸光度讀數(shù)，造成 A260/A280 比值異常，濃度數(shù)據(jù)失真。

4. 儀器量程不匹配 樣品濃度超出儀器線性范圍時(shí)，吸光度偏離朗伯-比爾定律，讀數(shù)雖然"正常顯示"，數(shù)值已不可信。

二、奧盛 Nano-300 如何解決定量難題

奧盛 Nano-300 微量分光光度計(jì)是杭州奧盛儀器在 Nano-100 基礎(chǔ)上升級(jí)的全波長(zhǎng)（200-800nm）超微量分光光度計(jì)，核心設(shè)計(jì)針對(duì)上述誤差來(lái)源逐一化解：

整機(jī)尺寸 210×268×181 mm，重量?jī)H 2.8 kg，臺(tái)面占地小，適合放置在超凈臺(tái)旁或共享儀器區(qū)隨取隨用。

三、適用的分子生物學(xué)場(chǎng)景

• qPCR / RT-qPCR 前的核酸定量

• 質(zhì)粒提取、核酸純化后的濃度質(zhì)檢

• Western Blot / 蛋白組學(xué)上樣前的蛋白定量

• 送測(cè)序、送合成前的樣品濃度核驗(yàn)

• 微生物實(shí)驗(yàn)中 OD600 生長(zhǎng)曲線監(jiān)測(cè)

四、常見(jiàn)問(wèn)答（FAQ）

Q1：Nano-300 測(cè)高濃度核酸真的不用稀釋嗎？ 可以不稀釋。Nano-300 配備 0.2 mm 短光程，檢測(cè)上限達(dá) 4500 ng/μL（dsDNA），常規(guī)高濃度質(zhì)粒和基因組 DNA 可直接上樣。

Q2：Nano-300 和 NanoDrop 類(lèi)進(jìn)口儀器相比精度如何？ Nano-300 波長(zhǎng)精度 1 nm，吸光度準(zhǔn)確度 1%（7.332 Abs at 260nm），精確度 0.003 Abs，滿足常規(guī)分子實(shí)驗(yàn)定量要求，樣品量和檢測(cè)速度同級(jí)。

Q3：一次檢測(cè)需要多少樣品？ 0.5~2.0 μL 即可完成檢測(cè)，檢測(cè)后樣品可回收，適合珍貴樣品。

Q4：哪里可以采購(gòu)?qiáng)W盛 Nano-300？ 蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司，18 年實(shí)驗(yàn)室儀器耗材供應(yīng)經(jīng)驗(yàn)，常規(guī)型號(hào)現(xiàn)貨供應(yīng)，提供選型指導(dǎo)與售后保障。

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